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线粒体用健那绿溶液染色。
1、健那绿溶液
健那绿染液是一种将活细胞中线粒体染色的专用染料,可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色。线粒体中细胞色素氧化酶将染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。因此,健那绿染液可以用来染色线粒体。
2、健那绿溶液的原理
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。
3、健那绿溶液的配制方法
配制质量分数为1%健那绿染液:将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解。
4、健那绿溶液的主要用途
健那绿是专一性线粒体的活细胞染料,可使线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色,以在高倍显微镜下观察线粒体分布和形态。
线粒体的特点
1、大小
粒体的直径一般为0.5-1.0μm,长1.5-3.0μm,在光学显微镜下可见。在动物细胞中,线粒体大小受细胞代谢水平限制。不同组织在不同条件下可能产生体积异常膨大的线粒体,称为“巨线粒体”(megamitochondria):胰脏外分泌细胞中可长达10-20μm。
神经元胞体中的线粒体尺寸差异很大,有的也可能长达10μm;人类成纤维细胞的线粒体则更长,可达40μm。有研究表明在低氧气分压的环境中,某些如烟草的植物的线粒体能可逆地变为巨线粒体,长度可达80μm,并形成网络。
2、形状
线粒体一般呈短棒状或圆球状,但因生物种类和生理状态而异,还可呈环状、线状、哑铃状、分杈状、扁盘状或其它形状。成型蛋白介导线粒体以不同方式与周围的细胞骨架接触或在线粒体的两层膜间形成不同的连接可能是线粒体在不同细胞中呈现出不同形态的原因。
3、数量
不同生物的不同组织中线粒体数量的差异是巨大的。有许多细胞只拥有多达数千个的线粒体,而一些细胞则只有一个线粒体。大多数哺乳动物的成熟红细胞不具有线粒体。一般来说,细胞中线粒体数量取决于该细胞的代谢水平,代谢活动越旺盛的细胞线粒体越多。
健那绿,即Janus green B 染液,原来也曾译为詹纳斯绿 B,常用作线粒体专一性活体染色剂。原理线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态.
中性红:
死细胞的液泡不被着色或浅染,染料弥散于整个细胞中,细胞核和细胞质被染成红色。中性红是一种弱碱性 pH 指示剂,变色范围 pH6.4~8.0 之间(由红变黄)。在中性或微碱性环境中,植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌,由于液泡在一般情况下呈酸性反应,因此,进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色,在这种情况下,原生质和细胞壁一般不着色;死细胞由于原生质变性凝固,细胞液不能维持在液泡内,因此,用中性红染色后,不产生液泡着色现象,相反,中性红的阳离子,却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合,而使原生质与细胞核染色。
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